高價(jià)收購(gòu)二手層析柱;回收二手樹(shù)脂吸附柱;收購(gòu)二手離子交換柱;高價(jià)
回收二手不銹鋼層析柱。材料304/316L不銹鋼,柱管衛(wèi)生級(jí),拆裝方便;便
于清洗和更換,上下過(guò)濾采用不銹鋼燒結(jié)網(wǎng),上面配有液體分配器,下面
采用全面積滲透,篩網(wǎng)孔徑20μm。柱層析法的分離原理是根據(jù)物質(zhì)在硅膠
上的吸附力不同而使各組分分離。一般情況下極性較大的物質(zhì)易被硅膠吸
附,極性較弱的物質(zhì)不易被硅膠吸附。當(dāng)采用溶劑洗脫時(shí),發(fā)生一系列吸
附→解吸→再吸附→再解吸的過(guò)程,吸附力較強(qiáng)的組分,移動(dòng)的距離小,
后出柱;吸附力較弱的組分,移動(dòng)的距離大,先出柱。
硅膠柱層析流動(dòng)相:
極性小的用乙酸乙酯:石油醚系統(tǒng);極性較大的用甲醇:氯仿系統(tǒng);極性
大的用甲醇:水:正丁醇:醋酸系統(tǒng);拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸
一般都是利用極性相似相容原理,看流動(dòng)相與固定相的極性,大部分是固
定相的極性小于流動(dòng)相,然后流動(dòng)相的極性與所要洗脫的物質(zhì)極性比較接
近,從而將物質(zhì)洗脫下來(lái)。
柱層析技術(shù)又稱柱色譜技術(shù)。在圓柱管中先填充不溶性基質(zhì),形成一個(gè)固
定相。將樣品加到柱子上,用特殊溶劑洗脫,溶劑組成流動(dòng)相。在樣品從
柱子上洗脫下來(lái)的過(guò)程中,根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動(dòng)相中
分配系數(shù)不同,經(jīng)多次反復(fù)分配將組分分離。
原理: 柱層析法的分離原理是根據(jù)物質(zhì)在硅膠上的吸附力不同而使各組分
分離。一般情況下極性較大的物質(zhì)易被硅膠吸附,極性較弱的物質(zhì)不易被
硅膠吸附。當(dāng)采用溶劑洗脫時(shí),發(fā)生一系列吸附→解吸→再吸附→再解吸
的過(guò)程,吸附力較強(qiáng)的組分,移動(dòng)的距離小,后出柱;吸附力較弱的組分
,移動(dòng)的距離大,先出柱。
在分離分析特別是蛋白質(zhì)分離分析中,層析是相當(dāng)重要、且相當(dāng)常見(jiàn)的一
種技術(shù),其原理較為復(fù)雜,對(duì)人員的要求相對(duì)較高,這里只能做一個(gè)相對(duì)
簡(jiǎn)單的介紹。
一、 吸附層析
1、 吸附柱層析
吸附柱層析是以固體吸附劑為固定相,以**溶劑或緩沖液為流動(dòng)相構(gòu)成
柱的一種層析方法。
2、 薄層層析
薄層層析是以涂布于玻板或滌綸片等載體上的基質(zhì)為固定相,以液體為流
動(dòng)相的一種層析方法。這種層析方法是把吸附劑等物質(zhì)涂布于載體上形成
薄層,然后按紙層析操作進(jìn)行展層。
3、 聚酰胺薄膜層析
聚酰胺對(duì)極性物質(zhì)的吸附作用是由于它能和被分離物之間形成氫鍵。這種
氫鍵的強(qiáng)弱就決定了被分離物與聚酰胺薄膜之間吸附能力的大小。層析時(shí)
,展層劑與被分離物在聚酰胺膜表面競(jìng)爭(zhēng)形成氫鍵。因此選擇適當(dāng)?shù)恼箤?/span>
劑使分離在聚酰胺膜表面發(fā)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的連續(xù)過(guò)
程,就能導(dǎo)致分離物質(zhì)達(dá)到分離目的。
二、 離子交換層析
離子交換層析是在以離子交換劑為固定相,液體為流動(dòng)相的系統(tǒng)中進(jìn)行的
。離子交換劑是由基質(zhì)、電荷基團(tuán)和反離子構(gòu)成的。離子交換劑與水溶液
中離子或離子化合物的反應(yīng)主要以離子交換方式進(jìn)行,或借助離子交換劑
上電荷基團(tuán)對(duì)溶液中離子或離子化合物的吸附作用進(jìn)行。`
三、 凝膠過(guò)濾
凝膠過(guò)濾又叫分子篩層析,其原因是凝膠具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),小分子物質(zhì)能進(jìn)
入其內(nèi)部,而大分子物質(zhì)卻被排除在外部。當(dāng)一混合溶液通過(guò)凝膠過(guò)濾層
析柱時(shí),溶液中的物質(zhì)就按不同分子量篩分開(kāi)了。
四、 親和層析
親和層析的原理與眾所周知的抗原一抗體、激素一受體和酶一底物等特異
性反應(yīng)的機(jī)理相類似,每對(duì)反應(yīng)物之間都有一定的親和力。正如在酶與底
物的反應(yīng)中,特異的廢物(S')才能和一定的酶(E)結(jié)合,產(chǎn)生復(fù)合物(
E-S')一樣。在親和層析中是特異的配體才能和一定的生命大分子之間具
有親和力,并產(chǎn)生復(fù)合物。而親和層析與酶一底物反應(yīng)不同的是,前者進(jìn)
行反應(yīng)時(shí),配體(類似底物)是固相存在;后者進(jìn)行反應(yīng)時(shí),底物呈液相
存在。實(shí)質(zhì)上親和層析是把具有識(shí)別能力的配體L(對(duì)酶的配體可以是類似
底物、抑制劑或輔基等)以共價(jià)鍵的方式固化到含有活化基團(tuán)的基質(zhì)M(如
活化瓊脂糖等)上,制成親和吸附劑M-L,或者叫做固相載體。而固化后
的配體仍保持束縛特異物質(zhì)的能力。因此,當(dāng)把圍相載體裝人小層析柱(
幾毫升到幾十毫升床體積)后,讓欲分離的樣品液通過(guò)該柱。這時(shí)樣品中
對(duì)配體有親和力的物質(zhì)S就可借助靜電引力、范德瓦爾力,以及結(jié)構(gòu)互補(bǔ)效
應(yīng)等作用吸附到固相載體上,而無(wú)親和力或非特異吸附的物質(zhì)則被起始緩
沖液洗滌出來(lái),并形成了個(gè)層析峰。然后,恰當(dāng)?shù)馗淖兤鹗季彌_ 液的PH值
、或增加離子強(qiáng)度、或加人抑③劑等因子,即可把物質(zhì)S從固相載體上解離
下來(lái),并形成了*M個(gè)層析峰(見(jiàn)圖6-2)。顯然,通過(guò)這一操作程序就可
把有效成分與雜質(zhì)滿意地分離開(kāi)。如果樣品液中存在兩個(gè)以上的物質(zhì)與固
相載體具有親和力(其大小有差異)時(shí),采用選擇性緩沖液進(jìn)行洗脫,也
可以將它們分離開(kāi)。用過(guò)的固相載體經(jīng)再生處理后,可以重復(fù)使用。
上面介紹的親和層析法亦稱特異性配體親和層析法。除此之外,還有
一種親和層析法叫通用性配體親和層析法。這兩種親和層析法相比,前者
的配體一般為復(fù)雜的生命大分子物質(zhì)(如抗體、受體和酶的類似底物等)
,它具有較強(qiáng)的吸附選擇性和較大的結(jié)合力。而后者的配體則一般為簡(jiǎn)單
的小分子物質(zhì)(如金屬、染料,以及氨基酸等),它成本低廉、具有較高
的吸附容量,通過(guò)改善吸附和脫附條件可提高層析的分辨率。
五、 聚焦層析
聚焦層析也是一種柱層析。因此,它和另外的層析一樣,照例具有流
動(dòng)相,其流動(dòng)相為 多緩沖劑,固定相為多緩沖交換劑。
聚焦層析原理可以從PH梯度溶液的形成、蛋白質(zhì)的行為和聚焦效應(yīng)三
方面來(lái)闡述。
1、PH梯度溶液的形成
在離子交換層析中,PH梯度溶液的形成是靠梯度混合儀實(shí)現(xiàn)的。例如
,當(dāng)使用陰離子 劑進(jìn)行層析時(shí),制備PH由高到低呈線性變化的梯度溶液的
方法是,在梯度儀的混合室(這層析柱者)中裝高PH溶液,而在另一室裝
低PH極限溶液,然后打開(kāi)層析柱的下端出口,讓洗脫液連續(xù)不斷地流過(guò)柱
體。這時(shí)從柱的上部到下部溶液的PH值是由高到低變化的。而在聚焦層析
中,當(dāng)洗脫液流進(jìn)多緩沖交換劑時(shí),由于交換劑帶具有緩沖能力的電荷基
團(tuán),故PH梯度溶液可以自動(dòng)形成。例如,當(dāng)柱中裝陰離子交換劑PBE94(作
固定相)時(shí),先用起始緩沖液(配方見(jiàn)表了一2)平衡到PHg,再用含PH6的
多緩沖劑物質(zhì)(作流動(dòng)相)的淋洗液通過(guò)柱體,這時(shí)多緩沖劑中酸性的組
分與堿性陰離子交換對(duì)結(jié)合發(fā)生中和作用。隨著淋洗液的不斷加人,住內(nèi)
每點(diǎn)的PH值從高到低逐漸下降。照此處理J段時(shí)間,從層析柱**部到底部就
形成了PH6~9的梯度。聚焦層析柱中的PH梯度溶液是在淋洗過(guò)程中自動(dòng)形
成的,但是隨著淋洗的進(jìn)行,PH梯度會(huì)逐漸向下遷移,從底部流出液的PH
卻由9逐漸降至6,并恒定于此值,這時(shí)層析柱的PH梯度也就消失了。
2.蛋白質(zhì)的行為
蛋白質(zhì)所帶電荷取決于它的等電點(diǎn)(PI)和層析柱中的PH值。當(dāng)柱中
的PH**蛋白質(zhì)的PI時(shí),蛋白質(zhì)帶正電荷,且不與陰離于交換劑結(jié)合。而
隨著洗脫劑向前移動(dòng),固定相中的PH值是隨著淋洗時(shí)間延長(zhǎng)而變化的。當(dāng)
蛋白質(zhì)移動(dòng)至環(huán)境PH**其PI時(shí),蛋白質(zhì)由帶正電行變?yōu)閹ж?fù)電荷,并與
陰離子交換劑結(jié)合。由于洗脫劑的通過(guò),蛋白質(zhì)周圍的環(huán)境PH 再次**PI
時(shí),它又帶正電荷,并從交換劑解吸下來(lái)。隨著洗脫液向柱底的遷移,上
述過(guò)程將反復(fù)進(jìn)行,于是各種蛋白質(zhì)就在各自的等電點(diǎn)被洗下來(lái),從而達(dá)
到了分離的目的。
不同蛋白質(zhì)具有不同的等電點(diǎn),它們?cè)诒浑x子交換劑結(jié)合以前,移動(dòng)
之距離是不同的,洗脫出來(lái)的先后次序是按等電點(diǎn)排列的。
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