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定量基礎(chǔ)
在光致發(fā)光中,**出的輻射總依賴于所吸收的輻射量。由于一個(gè)受激發(fā)的分子回到基態(tài)時(shí)可能以*躍遷的形式產(chǎn)生能量損失,因而**輻射的光子數(shù)通常都少于吸收輻射的光子數(shù),它以**效率Q來表示。
在固定的實(shí)驗(yàn)條件下,**效率是個(gè)常數(shù),通常Q小于1。對可用熒光檢測的物質(zhì)來說,Q值一般在0.1~0.9之間。熒光強(qiáng)度F與吸收光強(qiáng)度成正比。對于稀溶液,熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)溶液濃度、摩爾吸光系數(shù)、吸收池厚度、入射光強(qiáng)度、熒光的**效率及熒光的收集效率等成正相關(guān)。在其他因素保持不變的條件下,物質(zhì)的熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)溶液濃度成正比,這是熒光檢測器的定量基礎(chǔ)。熒光檢測器屬于溶質(zhì)型檢測器,可直接用于定量分析。
類型
熒光涉及光的吸收和**兩個(gè)過程,因此任何熒光化合物,都有兩種特征的光譜:激發(fā)光譜(excitation spectrum)和**光譜(emission spectrum)。
**光譜
一般所說的熒光光譜,實(shí)際上僅指熒光**光譜。它是在激發(fā)單色器波長固定時(shí),**單色器進(jìn)行波長掃描所得的熒光強(qiáng)度隨熒光波長(即**波長,Em)變化的曲線。熒光光譜可供鑒別熒光物質(zhì),并作為熒光測定時(shí)選擇合適的測定波長的依據(jù)。
激發(fā)光譜
熒光屬于光致發(fā)光,需選擇合適的激發(fā)光波長(Ex)以利于檢測。激發(fā)波長可通過熒光化合物的激發(fā)光譜來確定。激發(fā)光譜的具體檢測辦法是通過掃描激發(fā)單色器,使不同波長的入射光激發(fā)熒光化合物,產(chǎn)生的熒光通過固定波長的**單色器,由光檢測元件檢測。終得到熒光強(qiáng)度對激發(fā)波長的關(guān)系曲線就是激發(fā)光譜。在激發(fā)光譜曲線的大波長處,處于激發(fā)態(tài)的分子數(shù)目多,即所吸收的光能量也,能產(chǎn)生的熒光。當(dāng)考慮靈敏度時(shí),測定應(yīng)選擇激發(fā)波長。
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