食品微生物檢測技術(shù)探討

時間：2022-09-08作者：廣州市微生物研究所集團股份有限公司瀏覽：187

食源性病原菌已成為了當今危害**食品衛(wèi)生安全的主要因素，因而創(chuàng)建食品微生物整套迅速檢測戰(zhàn)略方針對保證食品質(zhì)量安全、確保人們身心健康較其重要。原文中從食品類微生物檢測的前解決、增菌、分離出來和聚集及其檢測各個階段具體描述了國內(nèi)國外較新的研究成果，為創(chuàng)建一體化、即時食品類微生物檢測服務(wù)平臺給予一定的基本。

伴隨著大家生活水平的日益提升及群眾安全防范意識的不斷強化，食品衛(wèi)生安全做為一個關(guān)聯(lián)需求側(cè)改革的重要**性公共衛(wèi)生服務(wù)問題也備受關(guān)注。在眾多食品衛(wèi)生安全檢測新項目中，微生物菌種污染源是引起食源性疾病的較關(guān)鍵要素。因而，創(chuàng)建迅速、精確、靈巧的當代微生物檢測方法在食品類監(jiān)控系統(tǒng)中至關(guān)重要。而食品類微生物檢測大概可分下列一些流程，試品前解決、增菌、分離出來和提液到檢測判斷等各個階段，文中則主要分析討論食品微生物迅速檢測的全套處理戰(zhàn)略方針。

傳統(tǒng)式微生物檢測方法包含形狀觀查、生物化學評定及血清學臨床診斷等瑣屑的實際操作，已無法達到當代食品類微生物檢測對敏感度、非特異和實效性的規(guī)定。因而，在基因、蛋清或者新陳代謝水準上，融會貫通分子生物學、物理和**化學等專業(yè)的全新技術(shù)，開發(fā)的當代檢測方法已變成現(xiàn)如今食品類微生物檢測行業(yè)的一大網(wǎng)絡(luò)熱點。

生物學方法該類方法在基因水準上對靶點微生物菌種開展檢測，特別是在適用難塑造或抗原體構(gòu)造繁瑣微生物菌種的評定及臨床診斷，主要包含ＰＣＲ、核酸分子雜交及基因集成ic等技術(shù)。此次關(guān)鍵剖析以PCR為主導以及有關(guān)的快檢方式。

Dna檢測

ＰＣＲ是一種身體之外酶促生成特殊ＤＮＡ精彩片段的技術(shù)，它利用以轉(zhuǎn)性、淬火和拓寬３個流程為一個周期時間的循環(huán)系統(tǒng)反映完成物質(zhì)的指數(shù)級增長。早在１９９０年代，ＰＣＲ以其高靈敏、非特異及迅速等優(yōu)點已在微生物檢測中獲得廣泛運用。近些年，伴隨著基本ＰＣＲ的持續(xù)完善，其衍化技術(shù)也被慢慢開發(fā)設(shè)計并運用于微生物檢測。相對性于擴增單一靶基因的基本ＰＣＲ，多種ＰＣＲ根據(jù)在同一反映系統(tǒng)中添加多對非特異引物設(shè)計來完成在同一反映管內(nèi)與此同時擴增好幾個總體目標基因，可用以與此同時檢測多種多樣生物或根據(jù)多基因交叉式確定來開展特殊微生物菌種評定或種下臨床診斷。如對于橙黃色金黃葡萄球菌的２３Ｓ ｒＲＮＡ、耐高溫核酸酶、血液凝結(jié)酶及其８種腸毒素的編號基因各自設(shè)計方案特異性引物設(shè)計，創(chuàng)建多種ＰＣＲ方法辨別奶制品中該菌產(chǎn)腸毒素的種類；各自以沙門菌和單增李斯特菌基因和金黃金黃葡萄球菌基因做為靶點設(shè)計方案３對引物設(shè)計，根據(jù)提升反映管理體系，創(chuàng)建了能與此同時迅速地檢測食品類中３種病原菌的三重ＰＣＲ法。

即時瑩光定量PCR（quantitative real-time pcr，ｑＲＴ－ＰＣＲ）技術(shù)是于１９９６年發(fā)布的一種根據(jù)檢測ＰＣＲ物質(zhì)瑩光數(shù)據(jù)信號的即時積累來判定或定性分析起止模版的方法。該法全過程密閉式反映且不用ＰＣＲ后處理工藝，防止了交叉式環(huán)境污染及溴化乙錠等有毒物質(zhì)的應(yīng)用，具備非特異強、相對高度自動化技術(shù)等優(yōu)勢。根據(jù)選擇非特異基因設(shè)計方案引物設(shè)計及探頭，ｑＲＴ－ＰＣＲ法近些年已在多種多樣發(fā)病病菌、黃曲霉菌、酵母菌及其乳酸菌飲料等關(guān)鍵食品微生物指標值的定性分析和定量分析檢測中被廣泛運用。很多學者仍在這個基礎(chǔ)上開展方法改進，進一步提高檢測高效率。如融合ＩＭＳ，ｑＲＴ－ＰＣＲ法不用前增菌就可以精確、迅速地檢測大腸埃希菌 O157:H7，合理減少了檢測周期時間。

雖然以上ＰＣＲ以及衍化技術(shù)具備高靈敏、迅速等優(yōu)勢，但方法執(zhí)行需要的價格昂貴實驗儀器比較嚴重限定了其在中國食品類檢測組織的應(yīng)用推廣。

環(huán)受體等溫過程擴增技術(shù)（loop-mediated isother ** l amplification，LAMP）是于2000年開發(fā)設(shè)計的一種不用擴增儀、結(jié)果可根據(jù)擴增副產(chǎn)品的渾濁度形象化判斷的新式Dna擴增法。它根據(jù)高效率鏈換置技術(shù)，可在１ｈ內(nèi)于控溫情況下特異性擴增ＤＮＡ達109～1010個復(fù)制。該法不用經(jīng)過繁雜變溫循環(huán)系統(tǒng)擴增全過程，混樣后僅需一個控溫管式反應(yīng)器就可以在短期內(nèi)進行，相較別的ＰＣＲ法具備何以類比的迅速、簡單、高精度及形象化等優(yōu)勢，因此在食品類微生物檢測行業(yè)愈發(fā)遭受親睞。２０１１年，在我國也公布并實行了對于出入口食品類中１５種病原菌的ＬＡＭＰ檢測方法的出入境簽證檢驗檢測國家標準 SN/T2754.12-2011。

但LAMP檢測方法也一樣具有一定的缺點，例如它的恒溫標準是必須做到60-65℃，一樣必須借助一些特殊儀器設(shè)備，也就造成不可以保證當場的檢測檢測，與此同時也易發(fā)生陽性結(jié)果。


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