SPE技術(shù)儀器裝置 固相萃取柱的重復(fù)使用

時(shí)間：2024-11-14作者：杭州川一實(shí)驗(yàn)儀器有限公司瀏覽：110

固相萃取柱生產(chǎn)廠商一般都強(qiáng)調(diào)其固相萃取柱是一次性使用的。但在實(shí)際工作中，人們?yōu)榱私低Ｍ滔噍腿≈軌蚨啻问褂?。我們?cè)?jīng)對(duì)美國(guó)瓦瑞安公司生產(chǎn)的Bond Elut Certify 鍵合硅膠固相萃取柱的重復(fù)使用的可能性進(jìn)行過(guò)評(píng)估 (J. Chromatogr. 137:619 ; 1993)。當(dāng)樣品基液是血漿時(shí)，這種固相萃取柱在經(jīng)過(guò)再生后可重復(fù)使用2-3次 (保持80%以上的回收率)。也有人報(bào)道固相萃取柱可重復(fù)使用10次 (J. Chromatogr. 307:371 ;1986)。新型的薄膜型固相萃取柱的再生相對(duì)較為*，反復(fù)使用的次數(shù)也會(huì)多一些。有人曾經(jīng)試驗(yàn)重復(fù)使用這種固相萃取柱15次之多。對(duì)固相萃取柱的重復(fù)使用在很大程度上取決于樣品基液的復(fù)雜程度。樣品基液越復(fù)雜，SPE柱重復(fù)使用的可能性就越小。
固相萃取膜片(SPE disk)的重復(fù)使用也是如此，在很大程度上取決于樣品基質(zhì)。如果樣品中的干擾物在固相萃取膜片上不保留，或雖然保留，但通過(guò)yi定的清洗、再生溶劑處理后能夠基本恢復(fù)其原有的功能，則可以考慮重復(fù)使用。有的可以重復(fù)使用高達(dá)10次。
對(duì)固相萃取材料的重復(fù)使用謹(jǐn)慎。先，使用過(guò)的固相萃取柱進(jìn)行再生。而且Z好是在使用完后馬上進(jìn)行再生。其次，對(duì)再生后的固相萃取柱進(jìn)行評(píng)估以保證其本底和回收率都可以接受。另外，還要考慮一下再生的成本是否值得。
SPE技術(shù)儀器裝置(十）固相萃取柱的重復(fù)使用

11. 固相萃取中的常見(jiàn)問(wèn)題
問(wèn) 題 原 因 解 決 方 法
在用反相SPE柱萃取時(shí)，洗脫餾份中有水。 1. 分析物洗脫之前SPE柱沒(méi)有很好的干燥。
1. 用氮?dú)饣蚩諝飧稍颯PE柱：用20-100微升含60-甲醇的水將SPE柱上的殘留水分除去。
Z后餾份中含有干擾物。 1. 干擾物與分析物被同時(shí)洗脫。



2. 干擾物來(lái)自SPE柱。 1. 在洗脫分析物之前選用中等性的溶劑將干擾物洗滌出SPE柱?？蓪煞N或更多中兼容的溶劑混合以達(dá)到不同的性。
選用對(duì)分析物親合力較大而對(duì)干擾物親合力低的SPE柱。
用兩根不同性的SPE柱以除去干擾物。如反相柱然后離子交換柱或硅膠柱。
2. 在柱子預(yù)處理之前用洗脫溶劑洗滌SPE柱。
SPE柱流速降低或阻塞。 1. 樣品存在過(guò)多的顆粒。
2. 樣品溶液粘度太大。 1. 對(duì)樣品進(jìn)行過(guò)濾或離心。
2. 用溶劑對(duì)樣品進(jìn)行稀釋。
反相柱從固態(tài)樣品中用萃取非性分析物。 1. 分析物不在液體溶液中。
1. 用甲醇、異丙醇或?qū)悠愤M(jìn)行均漿處理。然后過(guò)濾或離心，再用水對(duì)清液進(jìn)行稀釋為含水量為70-的水溶液。
用正相柱從固態(tài)樣品中萃取分析物。 1. 分析物不在液體溶液中。
1. 用非性溶劑 (如: 正己烷、石油醚、氯等)均漿。
用正相柱從脂肪樣品中萃取分析物。 1. 脂肪可與分析物一起被洗脫出來(lái)或降低SPE柱的吸附容量。 1. 用正己烷溶解脂肪。冰凍除去凝結(jié)的脂肪。
用反相柱從含蛋白質(zhì)的溶液中(血、、血漿)萃取分析物。 1. 分析物與蛋白質(zhì)鍵合使分析物通過(guò)SPE柱而沒(méi)有被保留。
1. 通過(guò)改變樣品的pH值或用水對(duì)樣品稀釋破壞蛋白鍵合。
2. 加酸除蛋白質(zhì) (如: HCIO4、TFA、)。
3. 加**溶劑除蛋白質(zhì) (如: 、或甲醇)。離心、然后用水或緩沖溶液將上清液稀釋至**溶劑含量少于10%。
從含有表面活性劑的溶液中萃取分析物。 1. 表面活性劑與SPE柱表面起作用。 1. 如果分析物是非離子狀態(tài)，可用離子交換柱除去表面活性劑離子。
2. 用二醇基柱除去非離子化的表面活性劑。
用常規(guī)柱 (60?)萃。取蛋白質(zhì)的回收率低。 1. 蛋白質(zhì)體積太大不能進(jìn)入萃取柱的微孔。
2. 蛋白質(zhì)不可逆地被吸附在反相SPE柱上。蛋白質(zhì)在SPE柱擔(dān)體微孔內(nèi)變性。 1. 用BAKERBOND大孔徑反相柱或離子交換柱。
2. 用BAKERBOND大孔徑反相柱或離子交換柱。
分析物回收率低
被吸附在萃取柱上
(如分析物與基液一起通過(guò)SPE柱) 1. SPE柱沒(méi)有很好地被預(yù)處理。
2. SPE柱的性不合適。
3. 分析物對(duì)樣品溶液的親合力遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于對(duì)SPE柱的親合力。
4. 當(dāng)大體積水樣品。
5. 通過(guò)SPE柱時(shí)，反相柱擔(dān)體失去柱子預(yù)處理時(shí)留下的甲醇。 1. 反相柱: 用甲醇、異丙醇或處理柱子，然后用稀釋樣品的溶劑處理柱子。注意不能讓SPE柱變干。
2. 選擇對(duì)分析物有明顯選擇性的SPE柱。
3. 改變性或樣品溶液的pH使分析物在樣品溶液中的親合力降低。
4. 在樣品溶液中加入1-2%的甲醇或異丙醇或。
分析物回收率低
分析物沒(méi)有被洗脫出SPE柱 1. SPE柱的性不合適。
2. 洗脫溶劑不夠強(qiáng)，無(wú)法將分析物從SPE柱上洗脫。
3. 洗脫溶劑體積太小
4. 分析物被不可逆地吸附在SPE擔(dān)體上。擔(dān)體-分析物作用力太強(qiáng)。 1. 選擇其它低性或選擇性弱的SPE柱。
2. 改變洗脫溶劑的pH值以增加其對(duì)分析物的親合力。
3. 增加溶劑體積。
4. 反相: 選擇疏水性弱的擔(dān)體。如果原來(lái)用的是C18，則改為C8、C2或CN。
陽(yáng)離子交換: 用羧酸取代苯磺酸。
陰離子交換: 用伯、仲胺代替叔胺。
萃取重現(xiàn)性差 1. 在添加樣品之前SPE柱已枯。
2. SPE柱**容量。
3. 樣品過(guò)柱流速太快。
4. 洗脫液流速太快。
5. 分析物在樣品中的溶解度太大，分析物在樣品過(guò)柱時(shí)與樣品同時(shí)通過(guò)柱子而沒(méi)有被保留。
6. SPE柱用性溶劑處理而洗脫溶劑是不兼容的非性溶劑。
7. 洗滌雜質(zhì)用的溶劑太強(qiáng)，部分分析物與雜質(zhì)同時(shí)被從SPE柱洗滌。分析物在這一步損失的多少取決于洗滌溶劑的流速、SPE的特性以及洗滌溶劑的體積。
8. 洗脫劑的體積太小。 1. 重新進(jìn)行SPE柱預(yù)處理。
2. 減少樣品量或選擇大容量柱。
3. 降低流速。離子交換時(shí)流速應(yīng)**5 mL/min。
4.在使用外力之前讓洗脫液滲透過(guò)柱。兩次500微升洗脫可能比一次1000微升較有效。
5. 通過(guò)改變樣品性或pH值而改變分析物的溶解度。
6. 在使用非性溶劑之前對(duì)SPE柱進(jìn)行干燥。


7. 降低洗滌溶劑的強(qiáng)度。



8. 增加洗脫溶劑的體積。
SPE技術(shù)儀器裝置(十）固相萃取柱的重復(fù)使用
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