血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)法

    血細(xì)胞計(jì)數(shù)器含有 2 個(gè)室,每個(gè)室充滿并蓋上蓋玻片后總體積為 9x10-3 ml, 每室有 9 個(gè)大方格,因此蓋上蓋玻片后每個(gè)大方格的容積為 0.1 mm3 或 1.0x10-4 ml,對(duì)計(jì)數(shù)來講,9 個(gè)大方格再進(jìn)行分隔沒有必要,可以忽略不計(jì)。

    實(shí)驗(yàn)材料

    細(xì)胞樣本

    試劑、試劑盒

    胰蛋白酶 細(xì)胞培養(yǎng)液

    儀器、耗材

    毛細(xì)吸管 載玻片 蓋玻片

    實(shí)驗(yàn)步驟


    1、按前述方案(見「胰蛋白酶處理分離細(xì)胞」)用胰蛋白酶處理細(xì)胞,細(xì)胞重懸于細(xì)胞培養(yǎng)液中。

    2、用毛細(xì)吸管吸出欲計(jì)數(shù)的兩份細(xì)胞標(biāo)本。依靠毛吸管作用細(xì)胞懸液進(jìn)人覆蓋蓋玻片的計(jì)數(shù)器。

    3、對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)器兩邊的 9 個(gè)大方格中各 5 個(gè)格即共 10 個(gè)格進(jìn)行計(jì)數(shù)。

    4、合汁 10 個(gè)大方格的細(xì)胞數(shù)(每室 5 個(gè),共 2 室),算出 1x10-3 ml 中的細(xì)胞數(shù)(每個(gè)大方格 1x10-4 mlx10 個(gè)大方格=10-3 ml 容積)。細(xì)胞總數(shù)乘以 1000 即得每毫升計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)。

    5、計(jì)數(shù)完畢后立即用雙蒸水清洗計(jì)數(shù)器和蓋玻片,然后用 70% 乙醇清洗,用擦鏡紙擦干。


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    注意事項(xiàng)


    應(yīng)用計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)出現(xiàn)的某些錯(cuò)誤的原因:

    • 取自原始細(xì)胞懸液的不均勻取樣。原始細(xì)胞懸液應(yīng)攪動(dòng)混勻,在細(xì)胞計(jì)數(shù)過程中細(xì)胞不應(yīng)沉淀至容器的底部。

    • 計(jì)數(shù)器室內(nèi)充填不夠或過度填充。計(jì)數(shù)室的容積是基于蓋玻片平穩(wěn)地置于計(jì)數(shù)器邊緣上,過度充填增加被計(jì)數(shù)的體積。

    • 細(xì)胞團(tuán)、細(xì)胞團(tuán)不毛吸作用進(jìn)人計(jì)數(shù)室,故被排斥在計(jì)數(shù)之外進(jìn)人計(jì)數(shù)室的小細(xì)胞團(tuán)較難精確計(jì)數(shù),甲個(gè)分散狀細(xì)胞懸液對(duì)精確計(jì)數(shù)來講是至關(guān)重要的,細(xì)胞應(yīng)徹底混合達(dá)到均勻化。


    杭州川一實(shí)驗(yàn)儀器有限公司專注于全自動(dòng)氮吹儀,一體化蒸餾儀,光化學(xué)反應(yīng)儀,氮?dú)獍l(fā)生器,分子蒸餾儀等, 歡迎致電 17366658694

  • 詞條

    詞條說明

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