響水水體中大腸菌群檢測(cè)分

時(shí)間：2019-05-03作者：廣分檢測(cè)技術(shù)（蘇州）有限公司瀏覽：69

1、普通乳糖蛋白胨培養(yǎng)液

 

蛋白胨 10g，牛肉膏 3g，乳糖5g，氯化鈉 5g，1.6％溴甲酚紫乙醇液 1.0mL，蒸餾水 1000mL，pH 7.2~7.4。

 

將蛋白胨、牛肉膏、乳糖、氯化鈉加熱溶解于1000mL蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH為7.2~7.4，再加入1.6％溴甲酚紫乙醇液1.0mL，充分混勻，分裝于有杜漢氏小管的試管中，每管10mL，115℃滅菌20min。

 

2、三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液

 

按上述普通乳糖蛋白胨培養(yǎng)液濃縮三倍配制，分裝于有杜漢氏小管的試管中，每管5mL。

 

1、 品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基（供平板分離用）

 

蛋白胨 10g， 乳糖 10g，K2HPO4 3.5g，瓊脂 15～20g，蒸餾水1000mL，無(wú)水亞硫酸鈉 5g，5％的堿性品紅乙醇溶液 20mL，pH 7.2~7.4。

 

4、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）（供發(fā)酵法平板分離用，3和4可任選一種）

 

蛋白胨10g，乳糖10g，K2HPO4 2.0g，瓊脂20g，蒸餾水1000mL，2％伊紅（曙紅）水溶液 20mL，5％美藍(lán)（亞甲藍(lán)）水溶液13mL，pH 7.2~7.4。

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(二)滅菌移液管、滅菌稀釋水、試管、杜漢氏小管、革蘭氏染色液、滅菌培養(yǎng)皿。

 

實(shí)驗(yàn)過程

 

(一)水樣的采集

 

供細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的水樣，必須按一般無(wú)菌操作的基本要求采集，并保證再運(yùn)送、貯存過程中不受污染。水樣從采集到檢驗(yàn)不應(yīng)**過4h ，在0～4℃下保存不應(yīng)**過24h ，如不能在4h 內(nèi)分析，應(yīng)在檢驗(yàn)報(bào)告上注明保存時(shí)間和條件。

 

1、自來(lái)水取樣：應(yīng)在水龍頭打開放水5min ，再用無(wú)菌容器接取水樣，待分析。如水樣內(nèi)含有余氯，則采樣瓶滅菌后按每500mL水樣加3％Na2S2O3.5H2O溶液1mL。

 

2、江、河、湖、池自然水體取樣：可用采樣器，采樣瓶應(yīng)先滅菌。采樣后，瓶?jī)?nèi)應(yīng)留有空隙。如果與其他化驗(yàn)項(xiàng)目聯(lián)合取樣，細(xì)菌學(xué)分析水樣應(yīng)采在其他樣品之前。

 

（二）初發(fā)酵試驗(yàn)

 

1、水樣稀釋：制備水樣的稀釋液，方法為用無(wú)菌移液管吸取水樣10mL放于盛有90mL無(wú)菌水和若干玻璃珠的錐形瓶中，充分振蕩使混合均勻，并使其中的細(xì)菌盡量呈單個(gè)存在，即為10-1稀釋液；再?gòu)?0-1制備10-2稀釋液。以此類推，稀釋到所需倍數(shù)。

 

2、接種和培養(yǎng)：以無(wú)菌操作于5支三倍濃縮培養(yǎng)基（接種**定應(yīng)先檢查杜漢氏小管內(nèi)有無(wú)氣泡）中各加入水樣10mL，5支普通培養(yǎng)基試管中加入水樣1mL，5支普通培養(yǎng)基試管中加入10-1稀釋液1mL， 小心混勻放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h 。此即5管法。

 

3、結(jié)果觀察：37℃中培養(yǎng)24h后取出觀察，觀察有無(wú)氣體（杜漢氏小管內(nèi)有無(wú)氣體）和酸產(chǎn)生（培養(yǎng)基有無(wú)變色）。在48h之間，培養(yǎng)管內(nèi)倒置的杜漢氏小管內(nèi)有任何量的氣體積累，或培養(yǎng)基顏色從紫色變?yōu)辄S色，便可初步斷定為陽(yáng)性反應(yīng)。

 

若實(shí)驗(yàn)所測(cè)定的15支管中均為陽(yáng)性反應(yīng)，說(shuō)明濃水樣污染嚴(yán)重，可將樣品進(jìn)一步稀釋后，再按上述方法接種、培養(yǎng)和觀察。


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