【抑菌效果檢測】抑菌試驗(yàn)的常用方法

時(shí)間：2021-04-28作者：廣州市微生物研究所集團(tuán)股份有限公司瀏覽：681

常量肉湯稀釋法

A、抗菌藥物貯存液制備
1.1.1.抗菌藥物貯存液制備 抗菌藥物貯存液濃度不應(yīng)**1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于較高測定濃度。溶解度低的抗菌藥物可稍**上述濃度?？咕幬镏苯淤徸詮S商或相關(guān)機(jī)構(gòu)。所需抗菌藥物溶液量或粉劑量可公式進(jìn)行計(jì)算。例如：需配制100 ml濃度為1280μg/ml的抗生素貯存液，所用抗生素為粉劑，其藥物的有效力為750μg/mg。用分析天平精確稱取抗生素粉劑的量為182.6 mg。根據(jù)公式計(jì)算所需稀釋劑用量為：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后將182.6 mg抗生素粉劑溶解于107.0ml稀釋劑中。制備抗菌藥物貯存液所用的溶劑和稀釋劑見表5。配制好的抗菌藥物貯存液應(yīng)貯存于-60℃以下環(huán)境，保存期不**過6個(gè)月。
B、藥敏試驗(yàn)用抗菌藥物濃度范圍
1.1.2.藥敏試驗(yàn)用抗菌藥物濃度范圍 根據(jù)NCCLS抗菌藥物敏感性試驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)，藥物濃度范圍應(yīng)包含耐藥、中介和敏感分界點(diǎn)值，特殊情況例外。
C、培養(yǎng)基
1.1.3. 培養(yǎng)基 NCCLS推薦使用Mueller-Hinton（MH）肉湯，pH7.2~7.4。需氧菌及兼性厭氧菌在此培養(yǎng)基中生長良好。在測試葡萄球菌對(duì)苯唑西林的敏感性時(shí)，應(yīng)在肉湯中加入2%（W/V）氯化鈉，按制造廠家的要求配制需要量的MH肉湯。嗜血桿菌屬菌使用HTM肉湯，肺炎鏈球菌和其它鏈球菌使用含2%~5%溶解馬血的MH肉湯。
D、接種物的制備
1.1.4.接種物的制備 有2種方法配制接種物，一是細(xì)菌生長方法，用接種環(huán)挑取形態(tài)相似待檢菌落3-5個(gè)，接種于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉湯中，35℃孵育2-6h。增菌后的對(duì)數(shù)生長期菌液用生理鹽水或MH肉湯校正濃度至0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)，約含1~2×108CFU/ml。二是直接菌落懸液配制法，對(duì)某些苛養(yǎng)菌，如流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌和鏈球菌及甲氧西林耐藥的葡萄球菌等菌株，推薦直接取培養(yǎng)18~24h的菌落調(diào)配成0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)的菌懸液。用MH肉湯將上述菌懸液進(jìn)行1∶100稀釋后備用。注意應(yīng)在15分鐘內(nèi)接種完配制好的接種物，并取一份接種物在非選擇性瓊脂平板上傳代培養(yǎng)，以檢查接種物純度。

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  詞條說明

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