珠磨研磨法均質(zhì)樣品提取RNA

時(shí)間：2014-08-21作者：深圳市安必勝科技有限公司瀏覽：110

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提取樣品核酸的一種高效方法是，把樣品與堅(jiān)硬的表面快速地碰撞，直至細(xì)胞壁、細(xì)胞膜崩解，釋放出胞內(nèi)容物。這里說的是：珠磨研磨法。

珠磨研磨法能快速裂解細(xì)胞供DNA或RNA提取，相對(duì)酶法的長(zhǎng)時(shí)間孵育以及專一性、成功率不高，好太多。酶法尚且需要先把基質(zhì)破碎才能提高消化效率。對(duì)于嬌嫩的RNA，長(zhǎng)時(shí)間的消化，耗不起。

說到這里，就不可避免地提出這樣的問題，我的樣品該用什么樣的研磨珠，需要多大的研磨強(qiáng)度？問題涉及到非常多變量，所以為了避免你想這個(gè)問題撓破頭皮，接下來兩篇文章將向你提供MOBIO實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期工作總結(jié)出來的一些行之有效的方法。

本篇圍繞動(dòng)物組織和植物樣品。

較古老的RNA提取法-

提取動(dòng)物組織RNA需要徹底研磨。以前，較常用的方法是用冷凍樣品，然后用研缽乳缽槌把組織樣品碾成粉末?？瓷先ネ茫瑓s存在研磨不充分的弊端。當(dāng)樣品被粉碎并重懸于高離序液裂解緩沖液，大分子基因組DNA增加了溶液的粘稠度可能會(huì)堵塞堵塞離心柱。為了克服這個(gè)問題，下一步要用注射器和針頭剪切基因組DNA以提高離心柱上去除基因組DNA的效率。

法與手持?jǐn)嚢铏C(jī)的缺點(diǎn)

現(xiàn)在都2012年了，/研缽乳缽槌這樣的老方法早已過時(shí)。這套方法，需要你要么弄好一個(gè)樣清理一下工具，要么準(zhǔn)備大量研缽乳缽槌應(yīng)付大量的樣品。手持?jǐn)嚢铏C(jī)也一樣。雖然能快速充分粉碎樣品，盡可能減少RNA的降解，但每用完一次需要清潔一下探針，避免樣品交叉污染。如果你備了一次性的探頭，手持?jǐn)嚢铏C(jī)也不失為一個(gè)好方法。缺點(diǎn)是，你一次只能處理一個(gè)樣品。

強(qiáng)力珠磨研磨-高通量提取，杜絕樣品之間交叉污染

于是，強(qiáng)力珠磨研磨設(shè)備出場(chǎng)了，大大提升批量處理能力。MOBIO根據(jù)大量客戶的反饋以及長(zhǎng)期研發(fā)過程的積累的想法，開發(fā)出一個(gè)儀器叫PowerLyzer? bench top homogenizer，作為珠磨研磨機(jī)它擁有了我們想要的所有功能。它工作時(shí)非常安靜，甚至不會(huì)引起桌面震動(dòng)。研磨管的水平放置方式大大提高研磨效率，縮短了研磨時(shí)間減少發(fā)熱量也減輕對(duì)核酸的損傷。較短的研磨時(shí)間帶來較好的RNA完整性。

我們用了哪種研磨珠？

提取動(dòng)植物組織我們使用了2.8mm的陶瓷研磨珠套管有兩個(gè)原因。**，2.8mm直徑的研磨珠非常適合一次10-20mg片塊的動(dòng)物組織或50mg的植物組織。我們測(cè)試過1.4mm直徑的研磨珠，短時(shí)快速的研磨效果沒有大研磨珠好。長(zhǎng)時(shí)間研磨會(huì)液化樣品增加RNA降解。使用單一品種研磨珠（相對(duì)于研磨珠混搭），樣品之間獲得的研磨效果均一性較好。大直徑高效的研磨珠能直接與組織接觸，不會(huì)被小直徑低效的研磨組合阻礙。采用2.8mm陶瓷研磨珠的*二大原因是，預(yù)灌研磨珠的管子采用的是特制塑料，能抵受得住高強(qiáng)度珠磨撞擊不會(huì)破裂。

選擇較合適的研磨速度和循環(huán)

不同的設(shè)備使用的研磨速度和循環(huán)都不一樣。我們測(cè)試了3500~5000RPM范圍內(nèi)提取動(dòng)物組織，其中較合適的研磨方案是3500RPM速度2個(gè)45s循環(huán)，中間休停30s。這個(gè)速度相當(dāng)于FastPrep的5.5檔。PowerLyzer比FastPrep較方便的一點(diǎn)是，它可以儲(chǔ)存任意循環(huán)次數(shù)和循環(huán)間的休停時(shí)間。你可以把較合適的研磨方案保存起來留下次用。




我們發(fā)現(xiàn)，提取植物RNA的較優(yōu)研磨方案是4200RPM轉(zhuǎn)速2個(gè)45s循環(huán)，中間休停30s。對(duì)比3500、4200、5000TPM不同轉(zhuǎn)速，發(fā)現(xiàn)提取包括葉片、莖、根部和種子等各種類型樣本，4200RPM能獲得較高得率。

最后

強(qiáng)力高速珠磨研磨機(jī)法比一次只處理一個(gè)樣本的研磨方法較有優(yōu)勢(shì)。對(duì)于換用此方法的人可能覺得需要重新摸索條件非常麻煩。幸好，我們已經(jīng)為你想好了。大量的研究數(shù)據(jù)已經(jīng)總結(jié)出一套較完善的研磨方案，你能一次性大量處理樣品而且獲得較高的RNA得率，較好的核酸分子完整性，再也不用冰浴樣品一個(gè)一個(gè)來了。

若果你對(duì)采用PowerLyzer?**試劑盒或經(jīng)驗(yàn)證適合大型強(qiáng)力珠磨研磨機(jī)使用的研磨珠套管，不妨猛點(diǎn)下面鏈接獲取更多信息。

提取組織RNA：PowerLyzer UltraClean Tissue & Cells RNA Isolation Kit

提取植物RNA：PowerLyzer UltraClean Plant RNA Isolation Kit PowerPlant

DNA提取試劑盒采用的就是2.38mm不銹鋼研磨珠，可直接在強(qiáng)力珠磨研磨機(jī)上使用。

 


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