百螢 Portelite 熒光法DNA定量試劑盒適用于Cytocite和Qubit熒光儀

時間：2023-11-10

一.百螢 Portelite 熒光法DNA定量試劑盒概述

在進(jìn)行各種分析的DNA樣品制備中，DNA定量是一項非常重要的任務(wù)。 Portelite 熒光DNA定量試劑盒提供了使用Qubit熒光儀操作Helixyte Green BR快速定量dsDNA的方法。它針對Cytocite 和Qubit 熒光儀進(jìn)行了優(yōu)化。 Portelite 熒光DNA定量測定在三個數(shù)量級上呈線性。該測定法對RNA上的雙鏈DNA（dsDNA）具有高度選擇性，并針對測量10 pg / μL至10 ng / μL的dsDNA濃度進(jìn)行了優(yōu)化。Helixyte Green-BR與dsDNA結(jié)合后表現(xiàn)出較大的熒光增強(qiáng)，并且比UV吸光度讀數(shù)高幾個數(shù)量級。

二.百螢 Portelite 熒光法DNA定量試劑盒適用儀器

位熒光計

Ex: 480nm

Em: 530nm

規(guī)格: 0.2mLPCR小瓶

CytoCite熒光計

Ex: 480nm

Em: 530nm

規(guī)格: 0.2mLPCR小瓶

三.百螢 Portelite 熒光法DNA定量試劑盒實驗方案

簡要概述

1. 準(zhǔn)備Helixyte Green BR工作溶液

2. 在每個0.2 mL PCR管中加入190 uL 1X Helixyte Green BR工作溶液

3. 在每個試管中添加10 uL DNA標(biāo)準(zhǔn)溶液或測試樣品

4. 在室溫下孵育2分鐘

5. 使用CytoCite 熒光儀或Qubit 檢測熒光

注意：打開之前，請將所有成分置于室溫下。

溶液配制

工作溶液配制

Helixyte Green-BR工作溶液：在DNA分析緩沖液（組分B）中稀釋200倍Portelite dsDNA試劑（組分A）。例如，要為8個樣品準(zhǔn)備足夠的工作溶液，請將5uL Helixyte Green BR（組分A）添加到1mL DNA分析緩沖液（組分B）

中。注意：通過用箔紙覆蓋或?qū)⑵渲糜诤诎抵衼肀Ｗo(hù)工作液免受光照。我們建議在塑料容器中操作而不是玻璃中制備該溶液，因為染料可能會吸附到玻璃表面。為了獲得佳結(jié)果，應(yīng)在準(zhǔn)備后的幾個小時內(nèi)使用此溶液。

實驗步驟

根據(jù)DNA樣品的估計濃度，樣品量可以在1?20 uL的范圍內(nèi)。的樣品量為10 uL，DNA濃度在0.2?100 ng / uL范圍內(nèi)。如果使用其他樣品體積，請在濃度計算中調(diào)整稀釋倍數(shù)。

10 uL樣品體積（DNA濃度在0.2?100 ng / uL范圍內(nèi)）實驗方案。

1. 在每個Cytocite 樣品管（＃CCT100）或等效的0.2 mL PCR管中添加190 uL 1X Helixyte Green BR工作溶液。注意：請使用薄壁聚丙烯透明0.2 mL PCR管，例如＃CCT100。

2. 向每個試管中加入10 μL DNA標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品，然后離心2?3秒進(jìn)行混合。

3. 將所有試管在室溫下孵育2分鐘。

4. 將樣品插入CytoCite 或Quibit 中，并通過熒光通道檢測熒光。若使用CytoCite，請遵循適用于CytoCite 熒光儀的程序。

標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)備

對于Portelite 分析，您可以選擇使用DNA標(biāo)準(zhǔn)液繪制校正曲線。

1. 在DNA分析緩沖液（成分B）中，用100 ng/uL的DNA標(biāo)準(zhǔn)BR#2（成分D）進(jìn)行1/3系列稀釋，得到30、10、3、1、0.3、0.1和0 ng/uL的DNA標(biāo)準(zhǔn)稀釋液。

2. 在每個試管中加入190 uL Helixyte Green BR工作溶液。

3. 將10 uL標(biāo)準(zhǔn)液或10 uL樣品添加到0.2 mL PCR管中。

4. 將反應(yīng)在室溫下孵育2分鐘。

5. 將樣品插入CytoCite ，并通過熒光通道檢測熒光。

詞條
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