百螢 Helixyte? iFluor 350 核酸標(biāo)記染料?實(shí)驗(yàn)方案

時(shí)間：2024-01-26作者：西安百螢生物科技有限公司瀏覽：107

一.百螢 Helixyte^TM  iFluor 350概述

 

Helixyte? iFluor 350 核酸標(biāo)記染料是我們 Helixyte 核酸標(biāo)記和綴合技術(shù)的關(guān)鍵成員之一。由于核酸分子中缺乏反應(yīng)性部分，標(biāo)簽/半抗原與核酸的標(biāo)記/綴合一直非常具有挑戰(zhàn)性。胸腺嘧啶和鳥苷經(jīng)常被探索用于核酸綴合，例如光交聯(lián)（通過補(bǔ)骨脂素與胸腺嘧啶）或鳥苷的化/尤氏標(biāo)記。然而，這些現(xiàn)有的綴合要么繁瑣，要么需要嚴(yán)格的條件且產(chǎn)量低，因此不適合常規(guī)實(shí)驗(yàn)室使用。在類似條件下，我們的 Helixyte 核酸標(biāo)記和綴合技術(shù)易于使用，產(chǎn)量高。 Helixyte? iFluor 350 核酸標(biāo)記染料提供了一種特的方法，通過簡單的混合步驟將 iFluor 350 熒光團(tuán)附著到核酸上。標(biāo)記試劑很容易與鳥呤的N7反應(yīng)形成穩(wěn)定的共價(jià)鍵。貼標(biāo)過程簡單、快速、產(chǎn)量高。標(biāo)記的核酸與未反應(yīng)的染料的分離可以通過簡單的乙醇沉淀、旋轉(zhuǎn)柱或透析來完成。由此產(chǎn)生的標(biāo)記 DNA/RNA 探針具有明亮的藍(lán)色熒光，可以使用 AMCA/Alexa Fluor 350 濾光片組輕松檢測到。它們可用于斑點(diǎn)、Northern 和 Southern 印跡、RNA 和 DNA 原位雜交、多色熒光原位雜交 (mFISH)、比較基因組雜交 (CGH) 或微陣列分析等。

 




二.百螢 Helixyte^TM  iFluor 350參數(shù)

Ex(nm)	345
Em(nm)	450
分子量	N/A
溶  劑	DMSO
存儲(chǔ)條件	在-15℃以下保存，避免光照


     

三.百螢 Helixyte^TM  iFluor 350實(shí)驗(yàn)方案

樣品分析方案

概述

將 DNA 與 Helixyte? iFluor 350 核酸標(biāo)記染料儲(chǔ)備溶液混合

37°C 孵育 1 小時(shí)

根據(jù)下游應(yīng)用的需要進(jìn)行純化。

 

溶液配制

除非另有說明，所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等份，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)

打開小瓶之前，請?jiān)谑覝叵陆鈨?/span> Helixyte? iFluor 核酸標(biāo)記染料。短暫離心以收集干燥的沉淀

制備 Helixyte? iFluor 核酸染料儲(chǔ)備溶液

1.將 110 μL DMSO 添加到 Helixyte? iFluor 350 核酸標(biāo)記染料小瓶中，制備 10 mM 儲(chǔ)備溶液。

注意：建議將任何未使用的儲(chǔ)備溶液分成一次性等份。將等分試樣儲(chǔ)存在 ≤-20 ℃ 下并避光。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

 

操作步驟

1.根據(jù)下表1中的信息準(zhǔn)備標(biāo)記反應(yīng)。

表 1. 標(biāo)準(zhǔn)核酸標(biāo)記反應(yīng)。

組分	添加到反應(yīng)中的體積	終濃度
DNA (1 mg/mL)	2 to 5 μL	2 to 5 μg
Helixyte? iFluor  350 核酸標(biāo)記染料儲(chǔ)備液	0.5 μL	50 μM
TE 緩沖液（pH 8 至 8.5）	添加足夠的緩沖液以將體積調(diào)整至 100 μL

注意：此 DNA:染料比例可產(chǎn)生適合大多數(shù)應(yīng)用的標(biāo)記效率?？筛鶕?jù)應(yīng)用要求調(diào)整 Helixyte? iFluor 350 核酸標(biāo)記染料的量或反應(yīng)孵育時(shí)間，以修改標(biāo)記密度。優(yōu)化 DNA 與染料的比例以獲得高的標(biāo)記率

2.避光、37℃孵育反應(yīng)1小時(shí)。

注意：孵育 30 分鐘后，短暫離心反應(yīng)，以盡量減少蒸發(fā)的影響并保持反應(yīng)組分適當(dāng)?shù)臐舛取?/span>

注意：或者，反應(yīng)可以在室溫下孵育 2 小時(shí)。為了獲得的標(biāo)記條件，我們建議在 37℃ 下孵育。

3.孵育后，可以純化標(biāo)記混合物以去除任何游離的標(biāo)記染料。有關(guān)說明，請參閱下面的“用酒精沉淀純化標(biāo)簽混合物”部分

 

用酒精沉淀純化標(biāo)簽混合物

1.將 0.1 體積 (10 uL) 5M 氯化鈉和 2 - 2.5 體積冰冷的 ** 乙醇 (250 uL) 添加到反應(yīng)中。充分混合并在 ≤ -20°C 下放置至少 30 分鐘。

2.在冷凍微量離心機(jī)中全速 (>14,000 x g) 離心 15-30 分鐘，沉淀標(biāo)記的核酸。沉淀后，用微量移液器小心地除去乙醇。不要打擾顆粒。

注意：少量核酸可能難以看到。在微量離心機(jī)中標(biāo)記并定向含有沉淀物的管，以便沉淀將在預(yù)定位置形成。

3.用 500 μL 室溫 70% 乙醇清洗沉淀一次。再全速離心 15-30 分鐘。

4.用微量移液器除去所有乙醇痕跡。不要讓樣品干燥過 5 分鐘，因?yàn)槌恋砜赡軙?huì)變得難以重新懸浮。

5.用約 30 μL 無菌水重懸標(biāo)記的 DNA。

6.儲(chǔ)存純化的、標(biāo)記的核酸以供長期保存或置于冰上以便立即使用。

 


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