鈣測量對于許多生物學研究至關重要,鈣離子熒光探針腔腸素是進行鈣測量的有效工具,跟著小螢一起看看它是怎么工作的吧。
1.百螢 鈣離子熒光探針腔腸素工作原理
水母發(fā)光蛋白復合物包含22kD的載水母發(fā)光蛋白,分子氧和發(fā)光體腔腸素。當三個Ca2 +離子與該配合物結合時,腔腸素被氧化為腔腸酰胺,并伴有二氧化碳和藍光的釋放。水母發(fā)光蛋白的生物發(fā)光對Ca2 +濃度的大約三次方依賴性,可以在?0.1 μM至> 100 μM的寬檢測范圍內測量Ca2 +濃度。與熒光Ca2 +指示劑不同,可以檢測Ca2 +結合的水母發(fā)光蛋白而照亮樣品,從而自發(fā)熒光的干擾。腔腸素及其衍生物賦予水母發(fā)光蛋白復合物不同的Ca2 +親和力和光譜性質。據(jù)報道,用腔腸素hcp重組的重組載脂蛋白水泡蛋白總體上具有發(fā)光,同時具有高產率和快速響應時間。但是,腔腸素類似物在細胞內重建水母發(fā)光蛋白可能相對較慢。含有腔腸素的cp,f或h形式的水母發(fā)光蛋白顯示的發(fā)光強度是用腔腸素重構的脫輔基水母發(fā)光蛋白的發(fā)光強度的10-20倍。腔腸素h和cp已用于GPCR的HTS篩選測定中。
鈣離子熒光探針腔腸素化學結構
2.百螢 鈣離子熒光探針腔腸素參數(shù)
Ex(nm) | 429 |
Em(nm) | 466 |
分子量 | 423.46 |
溶 劑 | |
存儲條件 | 保存在-15℃以下,避光防潮 |
詞條
詞條說明
百螢----LysoBrite溶酶體紅色DND-99熒光探針
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無信號1、一抗和二抗不匹配:二抗需和一抗宿主的物種相同(一抗來自鼠,二抗便是抗鼠抗體)。2、沒有足夠的一抗或二抗結合目標蛋白:使用高濃度抗體。4℃延長孵育時間。(如過夜)3、封閉劑與一抗或二抗有交叉反應:使用溫和的去污劑,如吐溫-20,或換封閉劑(常用脫脂奶粉、BSA、、明膠)。4、一抗不識別待檢物種的蛋白:參照說明書,對比原序列和蛋白序列以確??贵w和目的蛋白會發(fā)生反應。設置陽性對照。5、蛋白上樣
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