葡萄糖氧化酶(GOD)是一種含有黃素腺嘌呤二核苷酸的二聚體蛋白酶,是一種需氧脫氫酶,能專一性地將β-D-葡萄糖氧化為葡萄糖酸和過氧化氫。
葡萄糖氧化酶的作用機(jī)理*特、使用效果安全高效,在動(dòng)物生產(chǎn)中應(yīng)用廣泛。
1 葡萄糖氧化酶的生產(chǎn)
1.1 傳統(tǒng)方法生產(chǎn)葡萄糖氧化酶
誘變生產(chǎn)菌株,使用誘變劑處理后提高菌株的突變率,經(jīng)過篩選得到性狀好的突變菌株。誘變葡萄糖氧化酶生產(chǎn)菌株可以采用紫外線照射誘變和化學(xué)誘變劑等方法。紫外線照射影響菌體遺傳物質(zhì)的復(fù)制與合成,導(dǎo)致菌體突變。
梁靜娟等將黑曲霉菌株P(guān)-9采用紫外線照射進(jìn)行誘變,得到突變菌株的產(chǎn)酶酶活是原菌株的2.5倍?;瘜W(xué)誘變比紫外線照射誘變更具有定向性,也可以將兩種方法結(jié)合,能夠較好地提高菌株的產(chǎn)酶能力。
朱運(yùn)平等采用紫外線照射誘變、亞硝酸鈉化學(xué)誘變和紫外線照射-亞硝酸鈉復(fù)合誘變3 種方法對(duì)產(chǎn)胞外葡萄糖氧化酶黑曲霉菌株進(jìn)行誘變實(shí)驗(yàn),得到了產(chǎn)酶活力為原始菌株酶活力3.8倍的菌株。
1.2 工業(yè)化生產(chǎn)葡萄糖氧化酶
葡萄糖氧化酶的來源廣泛,包括細(xì)菌、真菌、紅藻、昆蟲等。真菌能夠利用各種碳源生產(chǎn)葡萄糖氧化酶,在1950 年真菌葡萄糖氧化酶已經(jīng)大規(guī)模應(yīng)用于工業(yè)。工業(yè)化生產(chǎn)葡萄糖氧化酶的菌株主要有黑曲霉和青霉,黑曲霉生產(chǎn)酶酶活較高,青霉生產(chǎn)酶速度快。除了黑曲霉和青霉外,擬青霉屬、膠霉屬和帚霉屬等也具有產(chǎn)葡萄糖氧化酶的能力。
1.3 基因工程構(gòu)建菌株
葡萄糖氧化酶的大規(guī)模生產(chǎn)受到產(chǎn)量低、發(fā)酵能力低、純化工藝復(fù)雜等因素的影響。隨著分子生物技術(shù)的進(jìn)步,使用基因工程技術(shù)將葡萄糖氧化酶的基因進(jìn)行克隆,連接到表達(dá)載體后轉(zhuǎn)化基因工程菌株,通過誘導(dǎo)表達(dá)葡萄糖氧化酶基因來獲取大量的葡萄糖氧化酶?;蚬こ叹攴置诘桨l(fā)酵液中主要是外源目的蛋白質(zhì),因此能簡化后期的蛋白質(zhì)分離、純化操作。目前,多種來源的葡萄糖氧化酶基因被克隆,并在畢赤酵母、釀酒酵母以及青霉屬等宿主中成功表達(dá)。
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